试验结果

SNAP25切割图

已纯化重组体GST-SNAP25-EGFP，是为了恢复“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”蛋白的活性化。由于野生型BoNT/A Lc切割了SNAP25的C末端部分，因此，GST&EGFP在各个N-末端和C-末端以25kDa大小进行了重组和纯化，以便确实地确认切割形式。通过“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”将75kDa的GST-SNAP25-EGFP切割为50kDa和25kDa的蛋白质。

SNAP25切割

GST-SNAP25-EGFP切割后大小的改变

GST, SNAP25, EGFP, 75kDa, GST, SNAP25, EGFP, 50kDa + 25kDa

  • 体外SNAP25切割试验

    体外SNAP25切割试验

    缓冲条件：1mM二硫苏糖醇、1mM羟乙基哌嗪乙硫磺酸、1mM氯化钠、2uM氯化锌
    反应：37℃，3hrs
    聚丙烯酰胺凝胶电泳负载条件
    - 12％的聚丙烯酰胺凝胶电泳
    -电压：120V

  • 体外SNAP25切割试验
    在体外以各剂量的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”与GST-SNAP25-EGFR蛋白进行反应，观察GST-SNAP25-EGFP是否会被“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”切割。结果显示，GST-SNAP25-EGFP蛋白是否会被切割为GST-SNAP25（50kDa）、EGFP（25kDa），主要取决于“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”的剂量。

细胞渗透试验

  • Vehicle Lc BPMed_BoLCA
    1 hr 角质细胞渗透
    3 hr
    6 hr

    “甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”渗透角质细胞
  • 角质细胞渗透
    以FITC共轭的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”蛋白对角质细胞进行细胞治疗。1至6小时后，可在细胞内观察到蛋白质。该结果表明“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”可渗透入皮肤。

    * 治疗条件
    - HaCaT细胞
    - 肽：5μm

  • Vehicle Lc BPMed_BoLCA
    人神经元细胞的潜力

    “甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”细胞渗透试验
  • 人神经元细胞的潜力
    以FITC共轭的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”蛋白对不同的SiMa细胞（人神经母细胞瘤）进行细胞治疗。3小时后，可在细胞内观察到蛋白质。该结果表明“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”可递送至肉毒杆菌蛋白质最重要的靶标细胞——人神经元细胞。

    * 治疗条件
    - FITC共轭：5μg
    - 时间：3hrs
    - 方法：共轭

  • 透皮扩散

    “甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”透皮扩散试验

  • 透皮扩散
    透皮扩散试验使用了Strat-M膜（密理博公司产品）。通过ELISA，将从30分钟至24小时的“甲硫胺酰基r-梭菌属肉毒杆菌多肽-1六肽-40”渗透量转化为累积频率。即使在24小时后，渗透仍在持续。
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